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Ni-NTA 亲和层析介质金属螯合亲和层析,又称固定化金属离子亲和层析(Immobilized metal ion affinity chromatography, IMAC) 。艾谱瑞金属螯合介质 GLK-gel Ni-NTA 是将氮川三乙酸(NTA)键合在琼脂糖的亲和层析介质。具有吸附容量大、选择性好、分辨率高、易于再生、成本较低等优点,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化,尤其是His-tag标记蛋白质的分离纯化。
一、GLK-gel Ni-NTA 亲和层析介质规格:
参数 | GLK-gel Ni-NTA | GLK-gel Ni-NTA+ |
基材类型 | 6%交联琼脂糖凝胶 | |
粒径分布 μm | 45-165 | 24-44 |
配基密度 μmol/mL | 12-18 | ~15 |
动态载量 mg 6xHis-tagged protein/mL | >30 | >30 |
最高耐压(MPa) | 0.3 | |
pH 稳定性 | 3-12(工作),2-14(CIP ,脱去金属离子) | |
建议流速 cm/h | <150 | |
GLK-gel Ni-NTA 亲和层析介质试剂耐受情况
试剂种类 | 耐受时间 |
0.01 M HCI ,0.1 M NaOH , 8M 尿素,6M 盐酸胍 | 1 week 40℃ |
1 M NaOH, 70%醋酸 | 12 hours 40℃ |
NTA 四齿配体共价键合在琼脂糖微球上,螯合固定 Ni²⁺离子;在中性 pH 条件下,Ni²⁺可与重组蛋白上 6 个连续His-tag形成配位键结合;提高咪唑浓度或降低 pH,即可竞争性洗脱目的蛋白。
NTA 相比 IDA(三齿):金属离子泄漏更少,样品中低浓度 EDTA 耐受更强,纯化产物镍残留更低。
大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞表达的His 标签重组蛋白一步纯化;
重力柱、蠕动泵、AKTA 等层析系统;批次吸附(batch)、柱层析两种操作模式;
蛋白固定化、酶固定化工艺开发(文献中可用于融合肝素酶固定化);
科研样品制备、生物药上游中间体纯化。
高机械强度琼脂糖骨架,高流速,耐 CIP 清洗,循环使用次数高;
载量优于进口经典 Ni-NTA,国产替代成本优势明显;
两种粒径可选:90μm 适合大体积粗样品快速捕获;37μm 细颗粒适合精细纯化、提升产物纯度;
广谱化学兼容性,可使用去污剂、还原剂(β-ME、TCEP);
平衡缓冲液:20 mM 磷酸盐,0.5 M NaCl,pH7.5~8.0(可添加 10~30 mM 咪唑减少杂蛋白非特异吸附);
洗脱缓冲液:平衡缓冲液 + 250~500 mM 咪唑;
再生:0.5 M EDTA 洗脱掉残留金属,重新上 Ni²⁺离子完成再生;
清洗:0.1~1M NaOH 在位清洗,去除顽固蛋白 / 内毒素。